کروماتوگرافی برهمکنش آبگریز - Hydrophobic interaction chromatography - HIC

کروماتوگرافی برهمکنش آبگریز – Hydrophobic interaction chromatography – HIC

کروماتوگرافی برهمکنش آبگریز

کروماتوگرافی برهمکنش آبگریز (HIC) :

در این روش پروتئین ها براساس تفاوت در میزان هیدروفوبیسته سطحشان از یکدیگر جدا می شوند، بدین صورت که میانکنش برگشت پذیر بین نواحی غیرقطبی در سطح پروتئین و لیگاندهای هیدروفوب تثبیت شده بر روی ہستر ستون کروماتوگرافی شکل می گیرد. پروتئین ها براساس تفاوت در میزان اسیدآمینه های هیدروفوب سطحی شان از یکدیگر تفکیک می شوند. این روش می تواند در فرآیندهای تخلیص چند مرحله ای به عنوان یکی از روش های میانی بکار گرفته شود.

عوامل موثر بر میانکنش هیدروفوب و لیگاند هیدروفوب در HIC :

میانکنش بین پروتئین های هیدروفوب و لیگاندهای هیدروفوب تحت تاثیر چند پارامتر است:

۱- نوع لیگاند

نوع لیگاند تثبیت شده (مثلا آلکیل یا آریل) تعیین کننده ویژگی جذب پروتئین می باشد. بطور کلی لیگاندهای آلکیل هیدروفوبیسیته بیشتری نسبت به آریل ها دارند. هرچقدر میزان لیگاندهای هیدروفوب تثبیت شده بیشتر باشد ظرفیت اتصال به پروتئین ستون نیز افزایش مییابد (شکلی زیر تعدادی از لیگاندهای هیدروفوب را نشان میدهد.)

معمول ترین رزین ها با گروه های هیدروفوب لینک شده به آگارز که در کروماتوگرافی HIC استفاده می شود.
معمول ترین رزین ها با گروه های هیدروفوب لینک شده به آگارز که در کروماتوگرافی HIC استفاده می شود.
معمول ترین رزین ها با گروه های هیدروفوب لینک شده به آگارز که در کروماتوگرافی HIC استفاده می شود.
معمول ترین رزین ها با گروه های هیدروفوب لینک شده به آگارز که در کروماتوگرافی HIC استفاده می شود.

۲- نوع ماتریکس

ماتریکس یا بستر ستون باید خنثی و البته هیدروفیل باشد تا میانکنش های یونی بین پروتئین و ماتریکس وجود نداشته باشد. دو بستر هیدروفیل مناسب که بسیار استفاده می شوند، آگارز کراس لینک شده یا کوپلیمرهای سنتتیک می باشند.

۳- نوع و غلظت نمک

یک غلظت نمکی بالا میانکنش را افزایش می دهد در حالیکه پائین آوردن غلظت نمکی میانکنش هیدروفوب را تضعیف می کند. باید به نوع نمک نیز توجه نمود بطوریکه نمک های کائوتروپ مثل سولفات یا کلراید منیزیم در آن اصلاً مناسب نیستند و میانکنش های هیدروفوب را تضعیف می کنند. برعکس سدیم، پتاسیم یا آمونیوم سولفات میانکنش های هیدروفوب را تقویت می کنند.


مقالات مرتبط :

ویدیو کروماتوگرافی تعویض یونی (IEC)

ویدیو کروماتوگرافی برهمکنش آبگریز (HIC)


pH -4

زمانیکه pH نزدیک pI است بار پروتئین نزدیک به صفر است و میانکنش های هیدروفوب بدلیل کاهش دافع های الکتروتستاتیک بین مولکول های پروتئین حداکثر است. بطور کلی افزایش pH در بسیاری از مورد با تضعیف میانکنش های هیدروفوب همراه است. البته لازم به ذکر است که اثر pH در کروماتوگرافی HIC کمی پیچیده است.

 ۵- حرارت

نقش حرارت در این کروماتوگرافی پیچیده است اما بطور کلی بالا بردن حرارت درگیری پروتئین با ستون را افزایش می دهد.

6- افزودنی ها

الکل ها، دترجنت ها و نمک های کائوتروپ میانکنش های لیگاند- پروتئین را در HIC تضعیف می کنند و باعث جدا شدن ترکیبات متصل شده از ستون می شوند، لذا هنگام استفاده از افزودنی ها باید دقت کافی بکار برد.

نتیجه گیری :

بنابراین پروتئین های متصل شده به رزین میتوانند با کاهش غلظت نمک، بالا بردن pH یا افزودن الکل ها و دترجنت ها از ستون جدا و شسته شوند.

نویسنده : سعید کارگر

کانال تلگرامی بیوتکنولوژی

 

کروماتوگرافی برهمکنش آبگریز

کروماتوگرافی برهمکنش آبگریز

 

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *